人胰島素elisa試劑盒采用的是雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)（ELISA）。測定樣品中人胰島素水平。向預(yù)先包被了抗人胰島素抗體的酶標(biāo)孔中，加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗胰島素抗體。再與HRP標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入顯色底物TMB，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。最后，在450nm處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD）值，樣本中的人胰島素濃度與OD值成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中人胰島素的濃度。

 

　　人胰島素elisa試劑盒的使用方法：

　　人胰島素elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本水平。用純化抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抗體，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品濃度。

 

　　1、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

　　2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

　　3、細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

　　5、保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

　　自備物品：

　　1、酶標(biāo)儀（450nm）

　　2、高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3、37℃恒溫箱